Determination of Blood Glucose by GOD/POD Method

Method –

Glucose Oxidase / Peroxidase

Principle –

जब Human Serum या Plasma में उपस्थित Aldehide group के glucose का glucose oxidase नाम के enzyme द्वारा water और Oxygen की उपस्थिती में आक्सीकरण होता है तब Gluconic Acid और hydrogen Peroxide बनता है-

Glucose + H2O + ½ O2 – Gluconic Acid + H2O2

अब यही “Hydrogen Peroxide”, “4 Aminophenazone” और “Phenol” के साथ मिलकर “Peroxidase” नामक Enzyme की सहायता द्वारा Pink colour का compound, “Quinoneimine” और “Water” बनाता है -

2 H2O2 + 4 Aminophenazone + Phenol – Quinoneimine + 4 H2O

अब इस Pink colour के compound को Spectrophotometer या colorimeter के द्वारा Read कर ली जाती है।

Requirement -

• Glucose Reagent
• Serological Micropipette And Tip
• Test Tube or Cuvette
• Test Tube or Cuvette Stand
• Incubator
• Spectrophotometer or Colorimeter or Semi Autoanalyzer

Spectrophotometer 

Sample –

Fluoride Plasma या Serum.

Reagent –

•  Buffer Enzyme (By mixing Glucoseoxidase 650units, Peroxidase 500units, 4-aminophenazone 20mg, Sodium Azide 30mg into 100ml of Phosphate buffer)
•  Phenol Reagent
•  Glucose standerd 

Preparation Of Glucose Reagent –

1 part Phenol में 2 part Buffer/Enzymes Reagent Mix करने पर Glucose Reagent तैयार हो जाता है। इसे 2-8 Degree centigrade पर Amber colored Bottle में store करके रखते है।

Procedure –

• सबसे पहले Glucose Reagent को room Temp. पर कर लें।
• अब Labeled Test Tube या Cuvette में निम्नवत Pipetting करते है-

                                    Blank               Standard          Test 

Glucose Reagent        1ml                    1ml                1ml

Distilled Water            10µl                    -                      -

Glucose Standard         -                        10µl                 -

 Plasma/Serum              -                         -                   10µl

• अब सभी Test Tube या Cuvette को अच्छी तरह मिलाते है और 10 मिनट room temp. पर या 5 मिनट incubator में 37 Degree centigrade पर Incubate करते हैं।
• अब मशीन पर 500nm-550nm Wave Length Set करते है और सबसे पहले Blank की Absorbance को मापते है ।
• इसके बाद Blank के Against Standard की Absorbance को मापते है।
• अब Standard के Against Test की Absorbance को मापते है और रीडिंग को नोट कर लेते है।

Calculation –

Plasma or Serum Glucose mg/dl 

                               

                             = O.D. of Test /O.D. of Standard ×100 mg/dl

OR

Plasma or Serum Glucose mg/dl 

                           

                     = O.D. of Test /O.D. of Standard × 5.55 mmol/L

Normal Values :-

• Fasting Blood Sugar – 70-110 mg/dl
• Post Prandial (P.P.) Blood Sugar – up to 140 mg/dl
• Random Blood Sugar – up to 150 mg/dl 

! Thank you !

A Special Thanks to Vineet Dixit for Recommended this Post and Helping Me to Write This Post.